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Rev Cubana de Farmacia. 2016;50(2)
ARTÍCULO ORIGINAL
Evaluación de desempeño de los métodos analíticos aplicados en la bromocriptina mesilato 2,5 mg tabletas de producción nacional
Performance evaluation of the analytical methods used in domestically-manufactured 2.5 mg bromocriptin mesylate tablets
Caridad Margarita García Peña,I Lisandra García Borges,I Vivian Martínez Espinosa,I Felicia de la Caridad Morales Peña,II Raúl Nápoles López,III Iverlis Díaz PolancoI
I Centro de Investigación y
Desarrollo de Medicamentos (CIDEM). La Habana, Cuba.
II Universidad de Ciencias Médicas
de La Habana. Cuba.
III Empresa Laboratorios Farmacéuticos
Oriente. Santiago de Cuba, Cuba.
RESUMEN
Introducción: la bromocriptina es
un derivado de la ergolina clasificado dentro de los agonistas D2
dopaminérgicos, actúa estimulando los receptores de dopamina en el
cuerpo estriado. En la Farmacopea de los Estados Unidos aparecen reportados
los métodos analíticos para la bromocriptina mesilato en el Ingrediente
Farmacéutico Activo y en las tabletas.
Objetivos: evaluar el desempeño de
los métodos analíticos que se emplean en el control de la calidad
del Ingrediente Farmacéutico Activo, así como su cuantificación
y los ensayos de disolución de las tabletas de bromocriptina mesilato 2,5
mg de producción nacional.
Métodos: en la evaluación del
desempeño del método para el Ingrediente Farmacéutico Activo
se evaluaron los parámetros de linealidad y precisión (repetibilidad
y precisión intermedia). Para su cuantificación y para el ensayo de
disolución se emplea un método por Cromatografía Líquida
de Alta Resolución; en el primero se evaluaron los parámetros de especificidad,
precisión y exactitud, mientras que para el método del ensayo de disolución
se analizaron la especificidad, precisión e influencia de la filtración.
Resultados: los resultados obtenidos en
la evaluación del desempeño de los métodos analíticos para
la bromocriptina mesilato en el Ingrediente Farmacéutico Activo y en las
tabletas fueron adecuados, resultando lineales, precisos y específicos
en el rango de concentraciones estudiadas.
Conclusión: se demostró la confiabilidad
de los métodos empleados en el control de la calidad y los estudios de
estabilidad tanto para el Ingrediente Farmacéutico Activo como para las
tabletas de bromocriptina mesilato 2,5 mg de producción nacional.
Palabras clave: bromocriptina mesilato; tabletas; espectrofotometría; cromatografía líquida de alta resolución; validación; ingrediente farmacéutico activo.
ABSTRACT
Introduction: Bromocriptin
is an ergolin derivative classified as dopaminergic D2 agonist and stimulates
the dopamine receptors in the striated body. US Pharmacopeia reports the analytical
methods for bromocriptine mesylate in the active ingredient and in tablets.
Objectives: To evaluate the performance of the analytical methods used
in the quality control of the active ingredient as well as its quantitation
and the dissolution tests for 2.5 mg bromocriptin mesylate tablets made in Cuba.
Methods: In the performance evaluation of the method for the active ingredient,
linearity and precision (repeatability and intermediate precision) parameters
were evaluated. For its quantitation and for the dissolution tests, the high
performance liquid chromatography method was used; the former evaluated the
specificity, precision and accuracy parameters were measured whereas the latter
specificity, precision and filtering effect were analyzed.
Results: The results of the performance evaluation of the analytical
methods for bromocriptine mesylate in the active ingredient and the tablets
were adequate, being these methods linear, precise and specific in the range
of studied concentrations.
Conclusions: The reliability of the methods used in the quality control
and the stability studies was proved for both the active ingredient and for
2.5 bromocriptine mesylate tablets made in Cuba.
Keywords: Bromocriptine mesylate; tablets; spectrophotometry; high performance liquid chromatography, validation; active ingredient.
INTRODUCCIÓN
La bromocriptina pertenece a una clase de medicamentos llamados agonistas del receptor de la dopamina. Las tabletas de bromocriptina mesilato 2,5 mg se indican en el tratamiento del ciclo menstrual dependientes de prolactina e infertilidad femenina, síndrome de ovario poliquístico, hiperprolactinemia masculina, impotencia, enfermedad de parkinson, entre otros.1,2
En la literatura aparece reportado un método analítico potenciométrico para el ensayo de valoración en el Ingrediente Farmacéutico Activo (IFA). Sin embargo, para el producto terminado, se reporta la Cromatografía Líquida de Alta Resolución (CLAR) para la cuantificación del IFA y el ensayo de disolución.3
Los métodos analíticos que se emplean en el control de la calidad y los estudios de estabilidad de medicamentos, deben de ser previamente validados para obtener pruebas documentales de la confiabilidad de los mismos para su posterior empleo.4-9 Recientemente, para obtener el registro de un medicamento por la agencia reguladora, se exige la evaluación del desempeño del método aplicado en la valoración del IFA.10
El ensayo de disolución constituye uno de los estudios más importantes en el desarrollo de una forma farmacéutica sólida oral. Permite evaluar los procesos de fabricación, la calidad intra e interlotes, además de predecir en algunos casos la bioequivalencia y biodisponibilidad de productos sólidos orales y la estabilidad del preparado farmacéutico.11
Este trabajo se realiza con el objetivo de evaluar el desempeño de los métodos analíticos aplicables en la valoración del IFA, así como en la cuantificación del principio activo y el ensayo de disolución de las tabletas de bromocriptina mesilato 2,5 mg.
MÉTODOS
La sustancia de referencia química de bromocriptina mesilato, correspondiente al lote 13001, fue suministrada por el grupo de sustancias de referencia del Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM, La Habana, Cuba), el cual fue analizado por el método potenciométrico establecido para realizar el control de la calidad de la materia prima, con una pureza de 99,6 %. El producto terminado en forma de tabletas, fue elaborado en los Laboratorios Oriente, identificado como el lote 14001, el cual cumplió con las especificaciones de calidad establecidas para el control de la calidad de las tabletas.
Todos los reactivos utilizados fueron de calidad analítica, procedentes de la Riedel-de Haen (España).
MÉTODO PARA LA VALORACIÓN EN EL IFA
Se pesaron con exactitud 600 mg de bromocriptina mesilato, se disolvieron en 80 mL de una mezcla de anhídrido acético: ácido acético glacial (7:1) y posteriormente se valoró con ácido perclórico 0,1 N.
En el estudio de validación del método se evaluaron los siguientes parámetros:
Linealidad
Para el estudio de la linealidad de la respuesta del detector se preparó una curva de calibración con solución de la sustancia de referencia química de bromocriptina mesilato en un rango de concentraciones que representan el 50-150 % de la concentración teórica del principio activo en la solución.
Criterios: la ecuación de la recta debe ser igual: y= mx + b; el coeficiente de correlación (r≥ 0,999); el coeficiente de variación de los factores de respuesta (C.Vf≤ 5 %); en la prueba de significación del intercepto, mediante la t Student, la t calculada (tcal) debe ser menor que la t tabulada (ttab) para un nivel de confianza de 95 %.10
Precisión
Se evaluó la precisión del método a través de los estudios de repetibilidad y precisión intermedia. La repetibilidad se estudió sobre la base de 10 determinaciones. Mientras que la precisión intermedia se realizó por dos analistas sobre la base de 10 determinaciones cada uno.
Criterios: Repetibilidad (C.V≤ 3,0 %). Precisión intermedia (t calculada debe ser menor t tabulada; F calculada debe ser menor F tabulada, para un nivel de confianza de 95 %).10
MÉTODO PARA LA CUANTIFICACIÓN DEL IFA
EN EL PRODUCTO TERMINADO
Para la determinación del IFA en el producto terminado se empleó la Cromatografía Líquida de Alta Resolución, se utilizó un cromatógrafo (KNAUER) con detector UV/VIS (KNAUER) ajustado a 300 nm, un dosificador (Loop) de 50 µL e integrador ( SHIMADZU CR 8 A). La separación se realizó isocráticamente sobre una columna Altima RP-18 (5 µm) (4,6 mm × 25 cm). La fase móvil consistió en una mezcla desgasificada de acetonitrilo: solución de carbonato de amonio 0,01 M (65:35); con una velocidad de flujo de 1,5 mL/min.3
La sustancia de referencia química y las muestras fueron preparadas según la metodología establecida en la Farmacopea de los Estados Unidos (USP 35, 2012).3
En el estudio de validación se evaluaron los siguientes parámetros:
Especificidad
Con el objetivo de evaluar la especificidad del método se analizó la sustancia de referencia química de bromocriptina mesilato, el placebo, la muestra y muestras sometidas a condiciones drásticas tales como hidrólisis ácida (HCL 1N), hidrólisis básica (NaOH 0,1 N) y oxidación.
Criterios: No se debe obtener señales del placebo, ni de los productos de degradación en la zona de elusión del ingrediente activo.4-10
Precisión
Se evaluó la precisión del método a través de los estudios de repetibilidad y precisión intermedia. La repetibilidad se estudió sobre la base de 6 determinaciones. Se calcularon los valores medio, la desviación estándar y el coeficiente de variación.
El estudio de precisión intermedia se realizó a tres niveles de concentración (80, 100, 120 %) por dos analistas, tres días diferentes.
Criterios: Repetibilidad (C.V≤2,0). Precisión intermedia (t calculada debe ser menor t tabulada; F calculada debe ser menor F tabulada), para un nivel de confianza de 95 %. 4-10
Exactitud
En el estudio de la exactitud se empleó el método de recuperación, preparando muestras con diferentes niveles de la concentración teórica del principio activo en la solución: bajo, medio y alto correspondiente con el 80, 100 y 120 %, respectivamente.
Criterios: recuperación media entre un 98,0-102,0 %, la G calculada debe ser menor que G tabulada para un nivel de confianza de 95 %.4-10
MÉTODO PARA EL ENSAYO DE DISOLUCIÓN
En la Farmacopea de los Estados Unidos, (USP 35, 2012), aparece reportado un método analítico para el ensayo de disolución de las tabletas de bromocriptina mesilato. En el presente estudio se empleó la prueba 2, el equipo empleado fue el Disolutor SR8 Plus Hanson Virtual Instruments de 6 plazas, aparato 2, velocidad 50 rpm, el medio de disolución se correspondió con una solución de ácido clorhídrico 0,1 N, para un volumen de 500 mL, con un tiempo de duración del ensayo de 30 minutos
La preparación de la sustancia de referencia química y de las muestras se realizó según lo establecido en la USP 35, para las tabletas de bromocriptina mesilato.3
Los parámetros evaluados fueron los siguientes:
Especificidad
Este estudio se realizó empleando 6 unidades del placebo y según el procedimiento descrito para el ensayo de disolución.
Criterio: No debe observarse interferencia de los excipientes de la formulación en la cuantificación del IFA.10-15
Precisión
La precisión se estudió empleando seis tabletas de bromocriptina mesilato 250 mg evaluándose en dos días diferentes.
Criterio: Los valores de t calculada de cada muestra debe ser menor que el valor de t tabulada para un nivel de confianza de 95 %.10-15
Influencia de la filtración
Se analizaron seis unidades del lote comparándose entre sí los resultados de las muestras filtradas por papel con las muestras centrifugadas a 3 000 rpm durante 10 minutos.
Criterios: Los valores de t calculada para cada una de las muestras al compararse estadísticamente con los resultados obtenidos de cada uno de los medios de filtración empleados, debe ser menor que el valor de t tabulado para un nivel de confianza de 95 %.10-15
RESULTADOS
EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO PARA EL IFA
Linealidad
La ecuación de la recta y= 1,3228 × -0,8481 se obtuvo en el rango de 50-150 % de la curva de calibración, con un coeficiente de correlación lineal de 0,9996. Al realizar la prueba de significación del intercepto se obtiene una tcal= 1,96 para una ttab= 2,16. Cuando se aplica la prueba de linealidad mediante los coeficientes de variación de los factores de respuesta (CVf ) se obtiene como resultado un coeficiente de variación CVf= 2,91 %.
Precisión
En la tabla 1, se reportan los resultados del estudio de repetibilidad y precisión intermedia para la valoración del IFA.
VALIDACIÓN DEL MÉTODO PARA LA CUANTIFICACIÓN DEL IFA EN EL PRODUCTO
TERMINADO
Especificidad
La figura muestra los resultados obtenidos en el estudio de especificidad del método.
Precisión
En el estudio de la repetibilidad realizado a una misma muestra, por el mismo analista, el mismo día, a través de seis réplicas, se alcanzó un coeficiente de variación adecuado (0,19 %), lo que demuestra la buena precisión del método según el límite para los métodos cromatográficos: CV≤ 2,0 %.
Los resultados del estudio de la precisión intermedia aparecen en la tabla 2.
Exactitud
En la tabla 3 se muestran los resultados obtenidos en el análisis de la exactitud del método.
VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO PARA EL ENSAYO DE DISOLUCIÓN
Especificidad
En el estudio de especificidad, no se observó señal de los excipientes de la formulación en la zona de elución de principio activo. Se observó similitud en los valores correspondientes a las muestra y la sustancia de referencia química.
Precisión e influencia de la filtración
En la tabla 4 se exponen los resultados de este estudio al analizar las tabletas de bromocriptina mesilato, en dos días diferentes. Se reportan además los valores de la prueba de la t de Student calculada para cada muestra y los resultados del estudio de influencia del filtro para cada filtro empleado, así como los valores de la prueba de t de Student calculada para cada evaluación realizada.
DISCUSIÓN
EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO PARA EL IFA
Linealidad
Los resultados obtenidos demuestran el cumplimiento de la linealidad en el intervalo de concentración estudiado, al obtenerse un intercepto no significativo por ser tcal menor que la ttab2,16 y el coeficiente de correlación mayor de 0,9990. Cuando se aplica la prueba de linealidad mediante el coeficiente de variación de los factores de respuesta CVf se obtiene como resultado un coeficiente de variación menor del 5 % lo que demuestra la adecuada linealidad de acuerdo con el límite establecido, por lo que se demuestra el cumplimiento de la linealidad en el intervalo de concentración estudiado.10
El coeficiente de variación de los factores de respuesta CVf demuestra también, la adecuada linealidad al cumplir con el límite establecido menor del 5 %.
Precisión
Los valores demuestran que no existen diferencias significativas entre las precisiones alcanzadas por ambos analistas, para un 95 % de probabilidad, ya que el valor calculado de la prueba de Fischer es menor que el tabulado.
Al realizar la prueba de Student el valor calculado resultó ser menor que el tabulado para un 95 % de probabilidad y 18 grados de libertad, lo que demostró que no existen diferencias significativas entre las medias alcanzadas por ambos analistas.10
VALIDACIÓN DEL MÉTODO PARA LA CUANTIFICACIÓN
DEL IFA EN EL PRODUCTO TERMINADO
Especificidad
En los cromatogramas no se obtiene ninguna señal, en el placebo, en la zona de interés, al ser comparado con la señal obtenida para la solución de referencia química y la muestra, lo que indica que los excipientes o sustancias auxiliares no interfieren en la determinación del principio activo. En cuanto a las muestras sometidas a condiciones drásticas se observan la disminución significativa en las muestras sometidas a hidrólisis ácida con la aparición de picos secundarios, sin interferencias en la determinación del principio activo.4-10
Precisión
En el estudio de la repetibilidad se alcanza un coeficiente de variación adecuado lo que demuestra la buena precisión del método según el límite para los métodos cromatográficos CV≤2 %.
Los valores que se obtienen de las pruebas de Fischer y t de Student, para el estudio de la precisión intermedia demuestran que no existen diferencias significativas entre las determinaciones alcanzadas por los analistas en diferentes días para una probabilidad de 0,05 %, ya que el valor de F calculada es menor que la F tabulada. Al realizar la prueba de t de Student el valor calculado resulta ser menor que el tabulado para una probabilidad de 0,05, lo cual demuestra que no existen diferencias significativas entre las medias obtenidas, con un nivel de significación de un 5 %.4-10
Exactitud
En la influencia del factor concentración sobre la variabilidad de los resultados de la exactitud al aplicar la prueba de Cochran se obtuvo que G calculada fue menor que la G tabulada para una probabilidad de 0,05, k= 3 y n= 3; por lo tanto, las varianzas de las concentraciones empleadas son equivalentes indicando que la concentración no influye en la variabilidad de estos. Al realizar la prueba de significación entre la recuperación media y el 100 % de recuperación, con un coeficiente de variación de 0,05 %, se obtuvo una t calculada menor que la t tabulada. En el rango seleccionado en el estudio de exactitud, los valores de porciento de recobro están dentro de los límites establecidos para los métodos cromatográficos (98-102 %) y los valores del coeficiente de variación, para cada uno de los niveles de concentración estudiados, fueron menores que el 2 %.4-10
VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO PARA EL ENSAYO DE DISOLUCIÓN
Especificidad
No se observó señal del ensayo de disolución del placebo, en la zona de elución de la bromocriptina mesilato, demostrándose la especificidad del método.10-15
Precisión
Los resultados del estudio de la precisión muestran que el método es preciso ya que en todos los casos no existieron diferencias significativas entre las medias para cada tiempo. Como se observa la t calculada resultó ser menor que la t tabulada [ttab (95 %, 5)= 2,57], en cada evaluación.10-15
Influencia de la filtración
No existieron diferencias significativas entre los resultados alcanzados, con el empleo de la centrífuga y el papel de filtro, ya que en todo momento la t calculada resultó ser menor que la t tabulada [ttab (95 %, 5)= 2,57]. Esto permite asegurar que la filtración no adsorbe el principio activo ni aporta interferencias al filtrado, por lo que es posible su empleo.10
Estos resultados permitieron demostrar la confiabilidad de los métodos empleados en el control de la calidad y los estudios de estabilidad tanto para el Ingrediente Farmacéutico Activo como para las tabletas de bromocriptina mesilato 2,5 mg de producción nacional.
CONFLICTO DE INTERESES
No declarado por los autores.
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Recibido: 31 de julio de 2015.
Aprobado: 11 de noviembre de 2015.
Caridad Margarita García Peña.
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